尊龙凯时人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：SMCM（ScienCell，1101）
传代方法：首次建议1:2传代，2天后换液
备注：使用无菌离心管收集培养基以进行对比培养；如效果不佳，建议购买我们的完全培养基。

二、细胞处理

在收到细胞后，应将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并用不同倍数拍照保存（最好40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则视为状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

细胞如未超80%汇合度，先将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基在37℃、5% CO2孵箱培养；细胞密度超过80%时可进行传代，具体步骤如下：1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，如细胞变圆并脱落，迅速放回操作台，并轻敲瓶子后加入5ml以上完全培养基终止消化；
3. 轻轻吹打细胞使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬；
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变化，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上再转入。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基，再接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在贴壁时可能不够牢固，运输过程中可能会有细胞脱落的情况，这是正常现象。如脱离较多，可将培养液收集至离心管中，进行离心处理，沉淀部分可加入胰酶进行消化，再重悬。之后按比例进行分瓶传代，补充新培养基后在37℃、5% CO2的条件下培养。

五、售后条款

1. 若细胞出现问题，符合重发条件的情况包括：
- 运输过程中出现问题，例如细胞丢失、瓶身破损等；
- 在收到产品48小时内报告的污染问题；
- 常温发货细胞静置24小时后，干冰发货细胞复苏后24小时内未存活（需提供清晰状态照片）；
- 细胞复苏后出现污染等情况。
2. 不予重发的情况包括：
- 由于客户原因造成的细胞污染；
- 错误操作导致细胞状态不佳；
- 非推荐培养体系导致的细胞状态问题；
- 未提供细胞状态的照片等。

在任何情况下，使用尊龙凯时的产品，请务必遵循操作说明，确保细胞的最佳状态与高效利用。